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我司教你如何用專業(yè)的方法凍存細(xì)胞
更新時(shí)間:2020-03-11   點(diǎn)擊次數(shù):2799次

我們知道,在細(xì)胞培養(yǎng)檢測實(shí)驗(yàn)在實(shí)驗(yàn)儀器、培養(yǎng)基等等工作上都要耗費(fèi)不少的人力和體力。好在很久以前就有高人發(fā)明了細(xì)胞保存這個實(shí)驗(yàn)步驟,將暫時(shí)多出來的細(xì)胞冰凍保存,以zui大程度保存細(xì)胞活力。

(1)凍存細(xì)胞傳統(tǒng)方法: 

冷存管置于4℃10分鐘--->-20℃30分鐘--->-80℃16~18小時(shí)(或隔夜)--->液氮槽vaporphase長期儲存。-20℃不可超過1小時(shí),以防止胞內(nèi)冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

(2)程序降溫:
利用已設(shè)定程序的等速降溫機(jī)以-1~-3℃/分鐘之速度由室溫降至(-80℃以下)-120℃,再放在液氮槽vaporphase長期儲存。適用于懸浮型細(xì)胞與hybridoma之保存。

凍存細(xì)胞步驟:

(1)冷凍前24-48小時(shí)更換半量或全量培養(yǎng)基,使細(xì)胞處于指數(shù)生長期。

(2)配制冷凍保存溶液(使用前配制):另取一離心管,加入培養(yǎng)基、血清,逐滴加入二甲基亞砜(DMSO)至20%濃度,即制成雙倍的凍存液,置于室溫下待用。

(3)離心收集培養(yǎng)之細(xì)胞,用加血清的培養(yǎng)基重懸起細(xì)胞,取少量細(xì)胞懸浮液(約0.1ml)計(jì)數(shù)細(xì)胞濃度及凍前存活率。

(4)取與細(xì)胞懸液等量的凍存液,緩慢逐滴加入細(xì)胞懸液,并晃動試管,制成細(xì)胞凍存懸液(DMSOzui后濃度為5~10%),使細(xì)胞濃度為1~5×106cells/ml,混合均勻,分裝于已標(biāo)示*之冷凍保存管中,1~2ml/vial,并取少量細(xì)胞懸浮液作污染檢測。嚴(yán)密封口后,注明細(xì)胞名稱、代數(shù)、日期。然后進(jìn)行凍存。

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